Бактериологическая диагностика мастита

Нижегородская государственная  сельскохозяйственная академия

 

Кафедра микробиологии, вирусологии и биотехнологии

 

 

 

 

Курсовая работа по микробиологии

на тему: «Бактериологическая  диагностика мастита»

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выполнен студентом

 

группа 

Проверил:

 

Доцент, к. в. н.

Предварительная оценка

Число, подпись

 

Проект защищен с оценкой

Число, подпись

 

 

 

 

 

 

 

 

Н. Новгород, 2011 г.

 

Содержание

Введение………………………………………………………………………3

1. Классификация маститов……………………………………………...4
2. Исследование особенностей микрофлоры и содержание лизоцима в молоке при мастите коров……………………………………….……7
3. Лабораторные исследования маститного молока………….………..11
4. Использование быстрых маститных тестов…………………………18
5. Противомаститные препараты……………………………………….21

Заключение…………………………………………………………………...24

Список литературы…………………………………………………………..25

 

Введение

Мастит – воспаление молочных железы, возникающее в ответ на воздействие факторов внешней и  внутренней среды, при снижении резистентности организма животных и осложнений инфекции.

В молочной железе могут  возникать разнообразные воспалительные процессы, характер которых зависит  от состояния организма животного, причины, вызвавшей воспаление, предрасполагающих  условий, на фоне которых оно протекает.

Маститы представляют собой  не только местный процесс, который  происходит в тканях пораженной части  вымени, но и сопровождаются более  или менее ярко выраженной реакцией всего организма, проявляющейся  угнетением, понижением аппетита, нарушением функции желудочно-кишечного тракта и сердечно-сосудистой системы, повышением температуры тела до 40°С и более  и т. д. Воспалительный процесс в  молочной железе, так же как и  в любом другом органе, является сложной реакцией организма, возникающей  в ответ на действие болезнетворных факторов. В зависимости от различных  сочетаний этих факторов возникают  разные по характеру маститы, поэтому  к лечению и профилактике маститов необходимо подходить дифференцированно. Учет особенностей конкретных, определенных форм маститов может обеспечить наибольший успех борьбы с ними.

 

Классификация маститов

Попытки дать обоснованную классификацию мастита предпринимались  как в нашей стране, так за рубежом.

Классификация мастита по Н. И. Полянцеву, 1981 год:

По проявлению заболевания: клинический и скрытый (субклинический);

По течению болезни: острый, подострый, хронический;

По характеру воспаления (клинический): серозый, катаральный, гнойный, фибринозный, геморрагический, смешанные  формы;

По обнаружению возбудителя:

 неспецифический –  бактериальный, микозный, асептический;

специфический – ящурный, актиномикозный, туберкулезный, бруцеллезный, оспенный, лептоспирозный.

Серозный мастит – ткани  воспаленной доли пропитываются  прозрачной жидкостью – серумом, выпотевающей из кровеносных и лимфатических  сосудов.

Заболевание начинается с  нарушений общего состояния: животные несколько угнетено, позыв на корм понижен, температура тела повышена, удой постепенно или резко снижается. Большая доля уплотнена, болезненна при ощупывании. Температура кожи этой доли, по сравнению с противоположной, повышена. Молоко из больной доли вымени более жидкое и в нем содержатся хлопья свернувшегося белка. При  своевременно начатом лечении выздоровление  наступает на третий день.

Катаральный мастит – чаще всего начинается с воспаления слизистой  оболочки молочной цистерны и молочных ходов. Количество молока в воспаленной  доле почти не уменьшается, но в нем  содержатся комочки слипшихся белых кровяных клеток и кусочки отмершей слизистой оболочки. Общее состояние животного, как правило, не изменяется.

При распространении воспалительного  процесса на железистую ткань количество молока уменьшается, в нем появляются хлопья и крошковидные сгустки. В  отстоявшейся пробе молока виден  слизисто-гнойный осадок. В пораженной доле у основания сосков прощупывается  уплотнение величиной с грецкий  орех. Если лечение начато своевременно, воспалительные явления затихают, однако продуктивность больной доли полностью  не восстанавливается. При запоздалом или неполном курсе лечения заболевание  принимает подострое или хроническое  течение.

Фибринозный мастит – развивается  как осложнение катарального мастита (при несвоевременном лечении  последнего) и как самостоятельное  заболевание при воспалительных процессах в половых органах  и желудочно-кишечном тракте. Фибринозный  мастит называется так потому, что  в тканевой жидкости содержится белок  крови – фибрин.

Заболевание характеризуется  угнетенным состоянием, повышением температуры  тела, болезненностью вымени, уменьшением  или полным прекращением молокоотдачи. Вначале в молоке появляются фибринозные  крошки, затем из соска пораженной доли с трудом выдаиваются несколько  капель сыворотки с примесью гноя и фибринозных крошек. При прощупывании молочной цистерны у ее основания  слышен хруст выпавшего фибрина, похожий на хруст снега. При осложнении фибринозного мастита развивается  гангрена вымени. После выздоровления  животного продуктивность пораженной доли полностью не восстанавливается.

Гнойный мастит – возникает  при осложнении катаральных и  фибринозных маститов. Заболевание  протекает в острой и хронической  формах. При остром течении болезни  животное резко угнетено, температура  тела достигает 41,5ºС, коровы отказываются от корма. Пораженная доля вымени отечна, при ощупывании животное испытывает сильную боль, удои резко снижаются, а из пораженной доли выделяется сыворотка с примесью гноя.

При своевременно начатом  лечении воспалительный процесс  затухает и может перейти в  хроническую форму. В результате больная доля постепенно уплотняется  и перестает вырабатывать молоко.

Геморрагический мастит –  как правило, развивается в первые дни лактации, поражает половину или  все вымя, ткани пропитываются  кровью, прошедшей через стенки кровеносных  сосудов. Заболевание сопровождается ухудшением общего состояния животного, отеком и болезненностью вымени. Из пораженных долей вымени выдаивается  небольшое количество красноватого водянистого молока, содержащего мелкие хлопья.

Флегмонозный мастит –  разлитое гнойное воспаление подкожной  клетчатки и интерстициальной ткани  молочной железы. Развитию флегмоны обычно предшествуют открытые механические повреждения  кожи и глублежащих тканей с внедрением анаэробной микрофлоры.

Флегмонозный процесс  бурно развивается, охватывая всю  долю или половину вымени. Кожа в  очаге воспаления багрового цвета, глянцевитая вследствие отека, горячая, болезненная; хорошо заметны воспаленные  лимфатические сосуды в виде тяжей, идущих к основанию вымени. Наружные паховые лимфатические узлы увеличены, болезненные. Из воспаленной доли с  трудом удается получить несколько  десятков миллилитров жидкого экссудата  серого цвета. Пораженные ткани претерпевают некроз с образование язв и  абсцессов; процесс может осложниться  сепсисом.

 

 

Исследование  особенностей микрофлоры и содержание лизоцима в молоке при мастите  коров

В патологии крупного рогатого скота значительное место занимают маститы.

Выживание возбудителя в  организме хозяина возможно при  соответствующей адаптации патогена к механизмам антимикробной защиты. Одним из объектов иммунодепрессивного  действия микроорганизмов является лизоцим, выполняющий как общебиологические, так и специализированные защитные функции. Имеются данные относительно динамики содержания и активности лизоцима в молоке в норме и при патологии. Бактерии обладают антилизоцимной активностью, необходимой для преодоления  лизоцимной защиты клеток в целях  освоения новой экологической ниши.

Материалы и методы. Всего обследовали 118 коров. При этом мастит диагностировали на основании результатов клинических, лабораторных (реакции с 5%-ным раствором димастина и пробой отстаивания) и бактериологических исследований. Выделенного в чистой культуре возбудителя идентифицировали до вида с последующим выявлением лизоцимной и антилизоцимной активности. Для определения лизоцимной активности молока использовали фононефелометрический метод. Рассчитывали коэффициенты корреляции между уровнем лизоцима в молоке и биологическими свойствами микроорганизмов.

Результаты исследований. Из отобранных коров 52 головы были практически здоровы, у 30 голов диагностировали скрытую и у 36 — клинически выраженную форму мастита. Для бактериологического анализа молоко высевали на среду Эндо, кровяной и желточно-солевой агары. У здоровых животных на среде Эндо рост культур отсутствовал, тогда как у больных этот показатель составлял 302 КОЕ; на кровяном агаре — соответственно сплошной рост и 1605 КОЕ; на желточно-солевом агаре— в среднем 4460 (в пяти пробах сплошной рост) и 602 КОЕ.

Микроорганизмы, выделенные из молока здоровых животных, были представлены в основном следующими видами стафилококков: Staph, aurlcularis, Staph, hominis (28,8 %), Staph, epider-midis (19,2 %), а также ассоциациями E. coti и Staph, epidermidis (5,8 %).

При бактериологическом исследовании проб молока от больных коров с  клинической формой мастита стафилококки (Staph, aureus, Staph, epidermidis, Staph, haemolyticus, Staph, auricularis) выделяли в 75,1 % случаев, энтеробак-терии (Е. coll) — в 16,7 и неферментирующие грамотрицательные палочки —  в 8,2 % случаев; со скрытой формой —стафилококки (Staph, aureus, Staph, epidermidis, Staph, hominis, Staph, warneri) — в 76,7 и энтеробактерии (E. coli) —  в 23,3 % случаев.

Из всех выделенных видов  стафилококков максимальное количество приходилось на долю Staph, aureus, которых  в основном обнаруживали в монокультуре (52,8 и 50,0 % соответственно при клинической  и скрытой формах мастита), далее  на Staph, epidermidis (13,9 и 20,0 %) и Е. coli (16,7 и 23,3%).

Так, у коров с клинической  формой мастита штаммы Staph, epidermidis и  Е. coli продуцировали лизоцим в 63,2 % случаев, a Staph, aureus — в 100 %.

Штаммы Staph, epidermidis и Е. coli, выделенные из молока при скрытой  форме болезни, инактивировали лиэо-цим  в 100 % случаев, тогда как при клинической  форме — соответственно в 32 и 33 %; штаммы Staph, aureus — в 70 % случаев и  отсутствовали.

Выраженность антилизоцимной активности у штаммов Е. coli и Staph, epidermidis при скрытой форме мастита  была 8 2,2—10,6 раза выше, чем при клинической  форме, Р<0,05.

Микроорганизмы, выделенные из молока здоровых животных, не продуцировали  лизоцим и не обладали способностью к его инактивации.

Уровень лизоцима в молоке при клинической форме мастита  в среднем составлял 1,6 мкг/мл (0,3—3,31), при скрытой форме — 0,4 (0,04—1,22), у здоровых животных — 0,13 мкг/мл.

Установили, что содержание лизоцима в молоке больных коров  увеличивалось при остром течении  болезни, а при скрытой форме, наоборот, уменьшалось, иногда до полного  исчезновения.

Для выяснения патогенетической роли антилизоцимного признака микроорганизмов  в формировании скрытого мастита  изучали связь между данным фактором персистенции бактерий и содержанием  лизоцима в молоке больных животных.

Отмечали, что из выделенных микроорганизмов преобладали стафилококки, способные инактивировать лизоцим  при скрытой форме мастита. Кроме  того, выявили обратную зависимость  между уровнем антилизоцимной активности патогена и содержанием лизоцима в молоке от больных животных.При клинической форме болезни доминировали лизоцимактивные микроорганизмы.

Исследования показали, что  содержание лизоцима в молоке находится  в прямой зависимости от биологических  свойств микрофлоры (г=0,98).

При мастите с выраженными  клиническими признаками высокую концентрацию лизоцима в секрете молочной железы можно объяснить двояко: с одной  стороны, усилением миграции лейкоцитов к очагу воспаления, их повышенной функциональной активностью с последующей  гибелью фагоцитов и выделением в окружающую среду (молоко) лизоцима и на фоне интенсивно протекающего фагоцитарного акта усиленным выходом  лейкоцитарного лизоцима за счет повышения  клеточной проницаемости фагоцитов; с другой — ростом лизоцимпродуцирующих штаммов. При скрытом мастите снижение лизоцима в молоке происходит за счет повышения числа штаммов, инактивирующих лизоцим, с высокими значениями антилизоцимного признака.

Таким образом, полученные данные позволяют предположить существование  системы лизоцим молока — антилизоцимная активность возбудителя при мастите коров, в которой взаимодействия между животным и патогеном отражают характер течения гнойно-воспалительного процесса и раскрывают одну из особенностей его патогенеза.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Лабораторные  исследования маститного молока

Возбудителями воспалительного  процесса вымени могут быть различные  микроорганизмы, в результате действия которых реакция молока отклоняется  от нормы и реакция молока из слабокислой  переходит в щелочную. Молоко становится солено - горьким, в нем появляются хлопья или тянущиеся нити. Позднее  выделяется гнойная жидкость, иногда с неприятным запахом. Наиболее опасное  поражение вымени вызывают маститые стрептококки - Streptococcus mastitidis, Streptococcus aqalactiae и стафилококки - Staphilococcus aureus.

Секрет вымени коров, давших положительную реакцию с одним  из быстрых маститных тестов, дополнительно  исследуют бактериологически для  выделения патогенной микрофлоры.

Для таких исследований отбирают пробы молока из четвертей вымени, реагирующих на быстрый маститный  тест с мастидином и дающих положительную  пробу отстаивания. Пробы разливают в центрифужные пробирки, уравновешивают, центрифугируют при 3000 оборотах 10-15 минут, из осадка готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и делают заключение о наличии стафилококков и стрептококков.

Для высева используют чаще всего агаровые питательные среды с добавлением крови, сыворотки, глюкозы. Посевы инкубируют в термостате при t=37°C в аэробных условиях в течении 24 часов. Можно выдерживать их в течении 48 часов. Из колоний делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Морфологические и культуральные свойства возбудителей мастита: