Исследования по фармакогностическому изучению и стандартизации препаратов грецкого ореха

 

На  правах рукописи 
 
 
 
 
 

Еникеева  Римма Айратовна 
 

Исследование  по фармакогностическому изучению и стандартизации сырья и препаратов Ореха грецкого (Juglans regia L.)  
 

15.00.02 –  фармацевтическая химия, фармакогнозия 
 

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук 
 
 
 
 

Москва 2008

      Диссертационная работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН. 

 Научный руководитель: 

Доктор фармацевтических

наук, профессор                           Сокольская Татьяна Александровна 

Официальные оппоненты: 

Доктор фармацевтических наук     Давыдова Валентина Николаевна 

Доктор фармацевтических наук        Баландина Ирина Анатольевна 

Ведущая организация: Научно-исследовательский Институт Фармации ММА И.М. Сеченова.  
 
 
 

      Защита  состоится «   »_____________2008 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) по адресу: 117216, Москва ул. Грина, 7. 
 

      С диссертацией можно ознакомиться в  научной библиотеке ВИЛАР РАСХН  по адресу 117216, Москва ул. Грина, 7. 
 

Автореферат разослан «___»_______________200   г. 
 

Ученый секретарь  диссертационного совета

Д 006.070.01

доктор фарм. наук                                                      А.И. Громакова 

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

     Актуальность  темы. В настоящее время, как в мировой, так и в отечественной фармацевтической практике достаточно широко используются фитопрепараты, в том числе гомеопатические, составляя около 40% от общего числа применяемых лекарственных средств (ЛС). Следует отметить, что генофонд лекарственных растений, используемых в традиционной медицине, насчитывает более 1200 видов, тогда как к медицинскому применению в РФ разрешено 260 видов, что свидетельствует о целесообразности проведения комплексных исследований по выявлению и изучению перспективных растений, произрастающих на территории России. К их числу следует отнести орех грецкий – Juglans Regia L., сем. Ореховые – Juglandaceae.

     Листья и олиственные молодые побеги с цветками ореха грецкого широко используются в официнальной медицине многих зарубежных стран, в качестве противовоспалительного, ранозаживляющего, антимикробного средства. В гомеопатической практике Германии, Франции, Великобритании, Индии применяется настойка гомеопатическая матричная (НГМ) ореха грецкого, получаемая из олиственных побегов, заготовленных в период цветения, и ее разведения, для получения гранул, капель, мазей, суппозиториев и других лекарственных форм. Выпуск препаратов на основе листьев ореха грецкого осуществляется на территории Украины (препарат Карион, настойка, суспензия и мазь Юглон). В России листья ореха грецкого находят применение только в народной медицине, а при использовании в гомеопатической практике делается ссылка на нормативные документы зарубежных стран. 

     В связи с этим представляется актуальным фитохимическое изучение ореха грецкого листьев с использованием современных методов физико-химического анализа и разработка методик стандартизации сырья и препаратов на его основе.

     Цель  и задачи исследования.

     Целью исследования является фармакогностическое  изучение ореха грецкого листьев, получение настойки гомеопатической матричной Югланс на его основе и их стандартизация.

        Для достижения указанной цели необходимо решить следующие основные задачи:

      1. Провести фармакогностическое исследование свежих и высушенных ореха грецкого листьев, исследовать основные группы биологически активных веществ (БАВ) и разработать методики их качественного и количественного определения.

      2. Изучить динамику накопления БАВ с целью установления оптимальных сроков заготовки сырья, составить проекты фармакопейных статей (ФС)  на свежее и высушенное сырье ореха грецкого, а также проект инструкции по заготовке сырья.

      3. Получить НГМ  Югланс и изучить их компонентный состав БАВ.

      4. Разработать методики стандартизации НГМ Югланс и составить проекты ФС на НГМ из свежего и высушенного сырья ореха грецкого

      5. Провести предварительное фармакологическое исследование НГМ Югланс.

     Научная новизна.

     На  основании макро- и микроскопического  анализа листьев ореха грецкого впервые установлены диагностические  признаки сырья. Проведено сравнительное  фармакогностическое изучение ореха грецкого листьев свежезаготовленных и высушенных и установлено, что количественное содержание флавоноидов, дубильных веществ и производных нафтохинона в свежем сырье несколько выше, чем в высушенном.

       Подобраны условия качественного  и количественного анализа БАВ в лекарственном растительном сырье (ЛРС) с применением современных методов физико-химического анализа: УФ-спектроскопии и различных видов хроматографии (ТСХ, ВЭЖХ). С использованием разработанных методик определен качественный состав и количественное содержание в ЛРС флавоноидов, дубильных веществ, нафтохинонов (юглона). Установлены различия в количественном содержании отдельных БАВ в зависимости от фазы вегетации ореха грецкого. Предложена схема получения стандартного образца юглона.

     Разработаны методики стандартизации ореха грецкого листьев Определены оптимальные сроки заготовки ЛРС, предназначенного для гомеопатической практики, а также проведены исследования по изучению перспективности использования НГМ, полученной из свежего и высушенного ЛРС. Получены НГМ Югланс из двух видов ЛРС, разработаны основные показатели их качества. При этом установлено, что качественный состав настоек идентичен, фармакологическая активность сопоставима.

      Практическая  значимость.

      На  основании проведенных исследований разработаны:

• Инструкция по заготовке листьев ореха грецкого высушенных           и свежих;
• проект ФС «Ореха грецкого листья свежие»;
• проект ФС «Ореха грецкого листья»;
• проект ФС «Juglans regia (Juglans). Настойка матричная гомеопатическая»;
• проект ФС «Juglans regia (Juglans) D1. Настойка матричная гомеопатическая».

      Положения, выносимые на защиту:

      1.Результаты  фармакогностического изучения  ореха грецкого листьев свежезаготовленных  и высушенных.

      2.Результаты  фитохимического анализа и разработки методик стандартизации сырья ореха грецкого, а также изучения динамики накопления БАВ.

      4. Результаты по разработке показателей качества НГМ Югланс.

      5.Результаты определения основных видов фарма-кологической активности НГМ Югланс, включая острую токсичность.

     Апробация работы.

     Материалы диссертационного исследования доложены на научно-практических конференциях: XVI Московской международной гомеопатической конференции (Москва, 2006), Региональной научно-практической конференции, посвященной 40-летию фармацевтического факультета КГМА (Курск, 2006), Конгрессе, посвященному 30-летию со дня открытия ЦНИИР «Традиционная медицина 2007г» (Москва, 2007), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики, лечение больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007), III Всероссийском гомеопатическом съезде (Москва, 2007).  

     Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки.

     Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ 2006-2010 гг.».

     Публикации.

     По  материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ.

     Объем и структура диссертации.

     Диссертация изложена на      страницах компьютерного текста, содержит    рисунков,    таблиц; состоит из обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, выводов, приложений и списка литературы. Список литературы включает 215 источников, из них 61 на иностранных языках.

     Глава I (обзор литературы) посвящена анализу данных литературы, содержащих сведения о ботанической характеристике и химическом составе, свойствах и применении Ореха грецкого. Приведены данные о ЛС, в том числе гомеопатических, полученных на основе ореха грецкого листьев и методах оценки их качества, зарегистрированных в зарубежных странах.

     Раздел  «Пояснения к эксперименту» посвящен характеристике объектов исследования: свежезаготовленных и высушенных ореха грецкого листьев, а также используемым в работе приборам, методам и методикам, сорбентам и реактивам.

     Во  второй главе приведены результаты экспериментальных исследований по изучению макро- и микродиагностических признаков ореха грецкого листьев, а также установлению числовых показателей, нормирующих качество ЛРС (влажность, зольность, измельченность, наличие примесей).

     Третья  глава посвящена фитохимическому изучению ореха грецкого листьев, определению основных групп БАВ, разработке методик их качественного и количественного анализа с использованием современных методов, включая ТСХ, ВЭЖХ, ЯМР-¹³С спектроскопию,  выделению и установлению физико-химических характеристик юглона, как превалирующего компонента группы нафтохинонов. Определены параметры стандартизации и оптимальные сроки заготовки и хранения ЛРС. Оформлены инструкции по заготовке ореха грецкого листьев, ФС на ореха грецкого листья свежие и высушенные и НГМ Югланс на их основе.

     Глава IV посвящена получению и изучению химического состава НМГ ореха грецкого листьев, полученных из свежего и высушенного сырья и разработке методик контроля их качества. Приведены результаты анализа флавоноидов, фенолкарбоновых кислот и нафтохинонов в НГМ Югланс с использованием методов ТСХ, ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии. Определены основные показатели качества настоек, условия и сроки их хранения.      

     Глава V посвящена фармакологической оценке НГМ Югланс и ее основных биологически активных компонентов с использованием метода in vivo, а также биотестирования in vitro.

Основное Содержание работы

1. Объекты, материалы и методы исследования

     Объектами исследования служили образцы  опытных  партий сырья  ореха грецкого листьев  свежих и ореха грецкого листьев  высушенных, заготовленных в Краснодарском  крае, окрестностях станицы Брюховецкая в 2005 – 2007г.

      Заготовку проводили в ореховых, смешанных лесах, на гребнях невысоких перевалов, а также на разделительных лесополосах полей в течение вегетационного периода с периодичностью в 15-20 дней, в следующие фазы вегетации: распускание листьев, бутонизация, начало цветения, цветение, конец цветения, начало плодоношения, плодоношение. Изучали как свежее, так и высушенное сырье.

     При качественном анализе использовали общие и специфические реактивы на группы действующих веществ, рекомендованные ГФ XI. Хроматографирование в тонком слое сорбента и на бумаге осуществляли согласно статье «Хроматография» ГФ XI. Детектирование веществ на хроматограммах осуществляли в видимом и УФ - свете до и после их обработки специфическими реактивами.

      Для приготовления хроматографических систем, а также для экстракции БАВ использовали растворители марки «ч» и «xч». Приготовление реактивов, используемых в экспериментальной части работы осуществляли согласно ГФ XI. Для проведения фитохимических исследований использовали свежевыжатый сок, а также водные и водно-спиртовые извлечения (1:10) из листьев ореха грецкого высушенных.

     Микроскопический  анализ цельного и измельченного  сырья проводили согласно статье "Техника микроскопического анализа" ГФ Х1 (вып.2, с. 277). Подготовка свежих листьев грецкого ореха для микроскопического исследования проводилась путем фиксирования сырья в смеси глицерин-спирт –хлоралгидрат (1:1:1), где выдерживают не мене  1-3 суток. После соответствующей подготовки сырья из него готовят микропрепаратов из цельного сырья ГФ Х1 (вып.2, с. 277).

     Микрофотографии сделаны на приборе фирмы «Zeiss» с камерой «Canon». Микроскопическое исследование выполняли с использованием следующих красителей: гематоксилин по Эрлиху в сочетании с антоциановым синим, а также сафранин по Картесу в сочетании с антоциановым синим.