Ферментные системы лейкоцитов

     T-лимфоциты  участвуют главным образом в  реакциях клеточного, а B-лимфоциты  — гуморального иммунитета. Морфологически T- и B-лимфоциты у человека неразличимы.  В последнее годы разработаны  методы, позволяющие отличать T- и  B-лимфоциты по ряду признаков.  Так, для T-лимфоцитов характерны  реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана и бласттрансформации в присутствии фитогемагглютининов (ФГА), высокая электрофоретическая подвижность. B-лимфоциты характеризуются наличием иммуноглобулиновых рецепторов на поверхности клеток, низкой электрофоретической подвижностью, способностью синтезировать антитела.

T-лимфоциты

В зависимости  от участия в иммунологической реакции T-лимфоциты делят на четыре группы:

     клетки  иммунологической памяти, т. е. узнающие чужеродный антиген и дающие сигнал к началу иммунологической реакции (антиген- реактивные клетки);

     эффекторы, осуществляющие иммунный ответ (антителопродуценты, эффекторы гиперчувствительности замедленного типа); основными клетками этой группы являются Т-киллеры — цитотоксические клетки, уничтожающие клетки трансплантата и мутантные клетки организма, в том числе опухолевые;

     T-хелперы,  обеспечивающие образование эффекторов, а также определяющие направление  и выраженность иммунного ответа;

супрессоры, тормозящие начало иммунного ответа и осуществляющие окончание этой реакции.

     Таким образом, T-лимфоциты в функциональном отношении представляют собой неоднородную группу клеток, хотя и имеют общего предшественника. Предшественники T-лимфоцитов, попадая в корковое вещество вилочковой железы, быстро размножаются и превращаются в тимоциты. Созревая, тимоциты проходят стадии развития T₁-лимфоцитов, T₂-лимфоцитов и, наконец, зрелых лимфоцитов.

     Общим для всех Т-лимфоцитов является наличие  на их поверхности тимусного человеческого лимфоцитарного антигена (THLA или OKT 1, или Leu-1). Этот T-антиген обнаруживается на всех тимоцитах, а в периферической крови — на 50—90 % лимфоцитов.

     На  ранних стадиях созревания T-лимфоцитов появляются специфические антигены OKT10, OKT9 и целый ряд других антигенов, которые исчезают по мере созревания лимфоцитов и выхода их из тимуса в  периферическую кровь. Часть T-лимфоцитов обладает высокой скоростью миграции, и отличие от B-лимфоцитов. Другая часть — оседлая, находится постоянно в периферических лимфатических органах.

     B-лимфоциты

     B-лимфоциты  развиваются из костномозговых  предшественников. В процессе созревания  они проходя г стадию пре-преB-лимфоцита, не имеющего рецепторов к иммуноглобулинам, стадию нреИ-лимфоцита, имеющего в цитоплазме тяжелые μ-цепи, и стадию раннего B-лимфоцита, имеющего на мембране клетки IgM. Дальнейшее созревание B-лимфоцитов происходит в периферической крови.

     В В-лимфоцитах всех степеней зрелости обнаруживается Ia-подобный антиген (HLA-DR2 и HLA-DR3), который  играет важную роль во взаимоотношении  клеток. Концентрация Ia-антигена постепенно снижается вплоть до полного исчезновения в плазматических клетках.

     Дифференцировка B-лимфоцитов как антигенозависнмых клеток происходит в зародышевых центрах фолликулов периферических лимфатических органов, которые появляются сразу после рождения. Это преимущественно оседлые клетки, мигрирующие значительно меньше T-лимфоцитов. В функциональном отношении B-лимфоциты также представляют собой неоднородную группу клеток. Среди них есть антителопродуценты (продуцирующие иммуноглобулины) — наиболее многочисленная группа, а также киллеры, супрессоры и клетки иммунологической памяти.

     Клетки-киллеры естественные

     Клетки-киллеры естественные (нулевые клетки) составляют в периферической крови 5—10 % общего числа лимфоцитов. Это клетки, не имеющие T- и B-маркеров. Предполагается, что эта группа включает стволовые клетки костного мозга, ранние предшественники T- и B-лимфоцитов.

     Цитохимическими и биохимическими исследованиями установлено, что лимфоциты содержат катепсин, нуклеазу, амилазу, липазу, нейтральную неспецифическую эстеразу, β-глюкуронидазу, кислую фосфатазу, сукцинатдегидрогеназу, цитохромоксидазу, аргинин, гистидин, гликоген.

Для лимфоцитов характерен высокий обмен РНК  и белков. T-лимфоциты, в отличие  от B-лимфоцитов, содержат аденозиндезаминазу и пуриннуклеозидфосфорилазу.

     Среди цитохимических реакций маркерными для лимфоидных клеток считаются  отрицательная реакция с Суданом  черным Б, отсутствие активности миелопероксидазы, а также положительная ШИК-реакция части лимфоидных клеток. Своеобразие распределения продукта ШИК-ре-акции в лимфоцитах в виде четких гранул, располагающихся по контуру ядра в цитоплазме, в противоположность диффузной ШИК-реакции в клетках гранулоцитопоэза, сделало этот тест маркерным при дифференциальной диагностике лимфоиролиферативных состояний от миелопролиферативных, хотя лимфоидные клетки относительно бедны полисахаридами.

     У детей в периферической крови  выявляются до 5% лимфоцитов с ШИК-положительной реакцией в виде множественных гранул, окаймляющих ядро, и 10-15% лимфоцитов с единичными ШИК-положительными гранулами.

     Гидролитические ферменты - кислая фосфатаза и а-нафтилацетат эстераза катализируют разрушение различных метаболитов и антигенов в клетке. Активность а-нафтилацетат эстеразы, определяемая методом азосочетания с применением синего прочного В, проявляется в лимфоидных клетках чаще в виде 1-3 крупных гранул в цитоплазме, а также слабого диффузного окрашивания. Вероятнее всего в виде гранул проявляется лизосомальная активность фермента, в диффузном виде - активность микросомальной фракции клеток. Диффузная а-нафтилацетат эстераза тормозится NaF, а гранулярная - резистентна к действию ингибитора в стандартной концентрации 1,5 мг/мл.

     В лимфоцитах преобладает гранулярная а-нафтилацетат эстераза. В периферической крови детей разных возрастов активность фермента колеблется: от 40 до 60% лимфоцитов содержат гранулы. Среди лимфоидных клеток лимфатических узлов при реактивных лимфаденитах 30-40% положительных, в стернальном пунктате здорового ребенка, по нашим данным, 20-40% положительных лимфоцитов.

     Активность  кислой фосфатазы, выявляемая методом  азосочетания в модификации Р. П. Нарциссова, в лимфоцитах периферической крови здоровых людей, по данным различных авторов, колеблется. Положительные клетки составляют от 26% до 80%. Реакция, как правило, по степени интенсивности мило меняется в положительных клетках, и поэтому коэффициент по Kaplow численно совпадает с процентом положительных лимфоцитов.

     Продукт цитохимических реакций выявления  гидролитических ферментов в  лимфоцитах постоянно обнаруживается преимущественно в виде 1-3 отчетливых гранул на слабо диффузном фоне. Такое постоянство в проявлении реакций дает основание пользоваться ими для определения лимфоидных клеток при патологических состояниях. Активность а-нафтилацетат эстеразы в лимфоцитах коррелирует с активностью кислой фосфатазы, но первая является значительно менее лабильным ферментом.

     Повышение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах обнаружено при экземе, бронхиальной астме, рахите, вакцинации против кори, оспы, полиомиелита. Существенное снижение процента эстеразоположительных лимфоцитов наблюдается при ХЛЛ и некоторых других лимфопролиферативных заболеваниях.

     Лимфоцит  циркулирующего пула относительно богат  окислительно-восстановительными ферментами. Это клетка преимущественно с  аэробным типом обмена. Среди большого количества дегидрогеназ, изучаемых цитохимическими методами, наибольшую популярность приобрели реакции на СДГ, ЛДГ, а-ГФДМ, а-ГФДГ, Г-6-ФДГ, И-5-МФД, ДОД.

     Известно, что энзиматическая активность лимфоцитов изменяется при иммунизации в эксперименте и после вакцинации у детей. Как правило, увеличивается активность кислой фосфатазы и СДГ. Если же наблюдается большая степень увеличения активности кислой фосфатазы, нежели СДГ, в течение поствакцинального периода могут возникнуть осложнения. При высоких значениях активности кислой фосфатазы в лимфоцитах периферической крови до прививок вероятность развития осложнений увеличивается. Так, ферментный статус лимфоцита позволяет прогнозировать возможность осложнений в течение того или иного процесса. В частности, степень активности НАДФ-Н2-диафоразы определяет течение токсико-инфекционного процесса.

     Диссоциация энергетических и катаболических процессов в лимфоцитах - увеличение активности кислой фосфатазы при снижении активности ряда дегидрогеназ - может быть цитохимическим критерием гиперчувствительности замедленного типа в период ее максимальной выраженности.  
 
 
 
 
 
 
 
 

     Список  использованной литературы

1. Патологическая физиология [Учебник для студентов мед. вузов]

Н. Н. Зайко, Ю. В. Быць, А. В. Атаман и др. К.: "Логос", 1996

2. Физиология человека: учебник для высших учебных заведений / Под ред В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. – 928 с. Учеб. лит. для студ. мед.  вузов

Интернет  сайты:

http://ru.wikipedia.org/wiki/Воспаление

http://humbio.ru/Humbio/immunology/imm-gal/00061b26.htm